# الملحق A: بروتوكول دلو الماء (WBP)

#### بروتوكول دلو الماء (WBP)

يعترف فريقنا بمتعةٍ خفيّة في اسمٍ بسيطٍ إلى هذا الحد لمشكلةٍ معقّدةٍ إلى هذا الحد، مثل توحيد تحليل eDNA في علوم الحدود الميدانية في المواقع النائية التي يديرها شباب من الشعوب الأصلية. 

إن مصدر الفكرة ثنائيّ الثقافة ومتعدد التخصصات حقًا، كما هو موضح في [الملحق B](/methodology/ar/almlahq/almlhq-b-altsmym-thnaey-althqafh-waltalyf-almshtrk.md). 

ملاحظة: هذا البروتوكول قيد التطوير النشط؛ وما هو مكتوب في هذه الصفحة سيتغير ويُحدَّث خلال العام القريب استجابةً للتغذية الراجعة المستمرة من المختبرين التجريبيين (انظر Bricolage)

#### **غرض WBC**

**يوحّد بروتوكول دلو الماء جمع بيانات eDNA.** وباستخدام مياه مُرشَّحة، وفترة زمنية موحَّدة، ومراكز القطع، فإنه يقلل الضوضاء ويعزز الإشارة في جمع بيانات eDNA. ولتلخيص قسم [حساب التنوع البيولوجي](/methodology/ar/altnwa-albywlwjy/hsab-altnwa-albywlwjy.md) ، فإن هذا يوفّر نهجًا متسقًا لمقارنة المواقع بمرور الوقت لتقييم التغيرات في سلامة النظام البيئي. 

**الهدف هو خفض التكاليف وتحسين الدقة عند استخدام eDNA بوصفه مؤشرًا**، وستحتاج النتائج إلى تطبيع إحصائي وفق منحنى موحّد لكل مشروع من أجل تحسين السلامة بمرور الوقت. إن WBC يجعل ذلك أسهل ببساطة عبر تقليص البيانات المتاحة إلى مجموعة أكثر دلالة، وخفض حجم العينة اللازم لتلبية متطلبات المخرجات لوحدات التنوع البيولوجي القابلة للتشغيل البيني (IBU) وللأهلية للحصول على إيرادات متكررة من رصيد التنوع البيولوجي التحسيني (حوالي 300 دولار/وحدة، انظر [وحدة التنوع البيولوجي](/methodology/ar/altnwa-albywlwjy/whdh-altnwa-albywlwjy.md)).  

#### قيود WBC

توجد قيود عملية جدية أمام الاختبار الميداني لـ eDNA. ولا يزال غياب مستويات مرجعية راسخة لـ eDNA عبر النظم البيئية التحديَ الرئيس لاستخدام eDNA في تقييمات تحسين التنوع البيولوجي عبر IBU، ويتفاقم ذلك بسبب الصعوبات اللوجستية في تصدير العينات وتكاليف التحليل اللازمة للحصول على مقاييس eDNA. ويتمثل أحد النهج الممكنة في إنشاء أخذ عينات خط أساس لـ eDNA في الغابات غير المتأثرة أو الغابات القديمة النمو، بما يمثّل الحفاظ في الشكل 4C. وتناسب المقاييس التقليدية البسيطة للتنوع البيولوجي، مثل غنى الأنواع، الرصدَ القائم على المجتمع، لكنها منخفضة القدرة الإحصائية، ولذلك تتطلب جهدًا كبيرًا في أخذ العينات لاكتشاف التغيرات البيئية بصورة موثوقة [(Lamb et al. 2009)](https://doi.org/10.1016/j.ecolind.2008.06.001). 

قد يكون الخطأ العشوائي في عينات eDNA مرتفعًا أيضًا ويؤثر في سلامة البيانات [(Lahoz-Monfort et al. 2016)](https://doi.org/10.1111/1755-0998.12486)، ومن ثمّ فإن الرصد الفعّال من حيث التكلفة يتطلب أخذ عينات قويًا إحصائيًا، ويفضل أن يكون ذلك عبر منحنيات معيارية إقليمية — وإن كانت قد تكون أكثر كلفة في التطوير في المناطق الأعلى تنوعًا بيولوجيًا.

ومع ذلك، نؤمن بالمضيّ قُدمًا ضمن الحدود حين نعثر عليها، وبأكبر قدر ممكن من العملية. ويهدف البروتوكول أدناه إلى تقليل ضوضاء أخذ العينات بطريقة فعّالة من حيث التكلفة.

#### **موقع أخذ العينات**

في حين أن حسابات IBU لدينا مصممة لمناطق مساحتها هكتار واحد، فإن أخذ العينات يُجرى عند مركز قطعة الأرض (بمتوسط خمسة هكتارات) لتحسين تمثيل شروط نظام الحراجة الزراعية نفسه، بدلًا من التنوع البيولوجي الذي يميل إلى التراكم عند حواف المناطق المزروعة. وينبغي استخدام حجم القطعة بوصفه متغيرًا مصاحبًا في النمذجة الإحصائية اللاحقة (انظر[ حسابات التنوع البيولوجي](/methodology/ar/altnwa-albywlwjy/hsab-altnwa-albywlwjy.md)).

#### **المواد**

* أربع دلاء مصدرها محلي، معقمة
* محلول مبيّض بنسبة 10% (للتعقيم)؛ ماء نظيف (للشطف)
* حوالي 4 لترات من المياه المُرشَّحة للملء
* قارورة عيّنة سعة 1 لتر، معقمة ومشطفة مرتين
* قفازات وأقنعة للوجه
* عدة ترشيح SimplexDNA ([simplexdna.com](https://www.simplexdna.com/))
* KoboToolbox أو ما يعادله لجمع البيانات الميدانية

ينبغي أن يتبع تلوين الدلاء نمطًا متسقًا: الألوان الفاتحة لجذب الملقِّحات، والألوان الداكنة أو ألوان التضاريس لجذب الحشرات التي تعيش في الخشب. قد تختلف مادة الدلو وشكله ولونه بين التجارب، لكن يجب إبقاؤها ثابتة ضمن جهد أخذ عينات واحد، وأن تكون متوافقة مع أهداف جمع البيانات.

#### **الإجراء**

1. **عقّم.** نظّف كل دلو بمحلول مبيّض بنسبة 10% ثم اشطفه مرتين بالماء. ولتجنب التلوث التبادلي، عَقِّم في الموقع ميدانيًا أو أغلِق الدلاء بإحكام أثناء النقل من موقع التطهير.
2. **ضع.** ضع الدلاء الأربعة حول مركز قطعة الأرض، على مسافة تقارب 10 م بينها. وثبّتها بحيث لا تنقلب: ادعمها بعصيّ على الأرض المنحدرة؛ وضع عليها أوزانًا من الحجارة في الأماكن التي توجد فيها حيوانات ترعى. وحافظ على التثبيت نفسه عبر الحقول (دائمًا في العراء، أو دائمًا قرب الشجيرات) — فإمكانية المقارنة بين المواقع أهم من أي خيار تثبيت منفرد.
3. **املأ.** أضف نحو 1 لتر من الماء المُرشَّح إلى كل دلو. وضع عصا مأخوذة من المنطقة المحيطة في الماء بحيث يمكن لأي حشرات تسقط داخله أن تخرج؛ فنحن نريد eDNA الخاص بها، لا الحشرات نفسها.
4. **عرّضها لمدة 72 ساعة.** اتركها دون إزعاج.
5. **لاحظ.** عُد بعد 72 ساعة وسجّل لكل دلو: ما إذا كان قد هطل المطر خلال فترة التعريض، ومستوى الامتلاء، ووجود أي كائنات حية أو ميتة. التقط صورة لكل دلو.
6. **امزج.** وأنت ترتدي القفازات وقناع الوجه، استخدم قارورة 1 لتر المعقمة لقياس لتر واحد من كل دلو وادمج الكميات الأربع كلها في أحد الدلاء المتبقية في الموقع.
7. **رشّح وخزّن.** رشّح العينة المركبة باستخدام عدة SimplexDNA. تعمل العدة يدويًا (بواسطة محقنة)، وهي بديهية في الميدان، وتخزّن المرشِّح في محلولٍ عازلٍ يحفظ الحمض النووي عند درجة حرارة الغرفة — وهي ميزة عملية مهمة حيث لا تتوفر التبريد. ويختلف الحجم القابل للترشيح باختلاف كمية الحطام؛ إذ ينسد المرشح تدريجيًا وقد يتطلب قوة كبيرة قرب نهاية الترشيح.

#### **الشكل X. بروتوكول دلو الماء، دلاء ملوّنة**


---

# Agent Instructions: Querying This Documentation

If you need additional information that is not directly available in this page, you can query the documentation dynamically by asking a question.

Perform an HTTP GET request on the current page URL with the `ask` query parameter:

```
GET https://sexytrees.savimbo.com/methodology/ar/almlahq/almlhq-a-brwtwkwl-dlw-almaa-wbp.md?ask=<question>
```

The question should be specific, self-contained, and written in natural language.
The response will contain a direct answer to the question and relevant excerpts and sources from the documentation.

Use this mechanism when the answer is not explicitly present in the current page, you need clarification or additional context, or you want to retrieve related documentation sections.