# Lampiran A: Protokol Ember Air (WBP) #### Protokol Ember Air (WBP) Tim kami mengaku punya kesenangan rahasia pada nama yang sangat sederhana untuk masalah yang sangat kompleks seperti standarisasi analisis eDNA sains perbatasan di lokasi kerja lapangan terpencil yang dijalankan oleh pemuda Masyarakat Adat. Sumber ide ini benar-benar bersifat bi-budaya dan multidisiplin, seperti dijelaskan dalam [Lampiran B](/methodology/id/lampiran/lampiran-b-desain-dwibudaya-dan-penulisan-bersama.md). CATATAN: Protokol ini masih dalam pengembangan aktif; apa yang tertulis di halaman ini akan berubah dan diperbarui dalam waktu dekat mengikuti umpan balik terus-menerus dari penguji pilot (lihat Bricolage) #### **Tujuan WBC** **Protokol ember air menstandarkan pengumpulan data eDNA.** Dengan memakai air yang sudah disaring, periode waktu yang seragam, dan centroid plot, protokol ini mengurangi noise dan meningkatkan sinyal dalam pengumpulan data eDNA. Sebagai ringkasan dari bagian [Perhitungan keanekaragaman hayati](/methodology/id/keanekaragaman-hayati/perhitungan-keanekaragaman-hayati.md) ini, pendekatan ini memberi cara yang konsisten untuk membandingkan lokasi dari waktu ke waktu guna menilai perubahan integritas ekosistem. **Tujuannya adalah menurunkan biaya dan meningkatkan akurasi saat memakai eDNA sebagai metrik**. Hasil perlu dinormalisasi secara statistik ke kurva standar per proyek untuk peningkatan integritas dari waktu ke waktu. WBC hanya membuat itu lebih mudah dengan mengurangi data yang tersedia menjadi set yang lebih bermakna, mengurangi ukuran sampel yang diperlukan untuk memenuhi syarat output bagi Interoperable Biodiversity Units (IBU) dan memenuhi syarat untuk pendapatan berulang dari kredit keanekaragaman hayati uplift (sekitar $300/unit, lihat [unit keanekaragaman hayati](/methodology/id/keanekaragaman-hayati/unit-keanekaragaman-hayati.md)). #### Keterbatasan WBC Ada kendala praktis yang serius untuk uji lapangan eDNA. Tidak adanya tingkat acuan eDNA yang mapan di seluruh ekosistem tetap menjadi tantangan utama untuk memakai eDNA dalam penilaian peningkatan keanekaragaman hayati melalui IBU, yang makin sulit karena kendala logistik untuk mengekspor sampel dan biaya analisis untuk memperoleh metrik eDNA. Salah satu pendekatan yang mungkin adalah membuat sampling garis dasar eDNA di hutan yang belum terganggu atau hutan tua, yang mewakili konservasi pada Gambar 4C. Metrik keanekaragaman hayati tradisional yang sederhana, seperti kekayaan spesies, cocok untuk pemantauan berbasis komunitas tetapi punya daya statistik yang rendah sehingga butuh upaya sampling yang besar untuk mendeteksi perubahan ekologis dengan andal [(Lamb et al. 2009)](https://doi.org/10.1016/j.ecolind.2008.06.001). Kesalahan acak dalam sampel eDNA juga bisa tinggi dan memengaruhi integritas data [(Lahoz-Monfort et al. 2016)](https://doi.org/10.1111/1755-0998.12486). Karena itu, pemantauan yang hemat biaya memerlukan sampling yang kuat secara statistik, idealnya dengan kurva normalisasi regional — walau ini bisa lebih mahal untuk dikembangkan di zona yang keanekaragaman hayatinya lebih tinggi. Namun begitu, kami percaya pada kemajuan batas-batas ketika kami menemukannya, sepraktis mungkin. Protokol di bawah ini dimaksudkan untuk mengurangi noise sampling dengan cara yang hemat biaya. #### **Lokasi sampling** Walau perhitungan IBU kami dirancang untuk area satu hektare, sampling dilakukan di centroid plot (rata-rata lima hektare) untuk mengoptimalkan kondisi sistem agroforestri itu sendiri, bukan keanekaragaman hayati yang cenderung menumpuk di tepi area pertanian. Ukuran plot harus digunakan sebagai kovariat dalam pemodelan statistik lanjutan (lihat[ Perhitungan keanekaragaman hayati](/methodology/id/keanekaragaman-hayati/perhitungan-keanekaragaman-hayati.md)). #### **Bahan** * Empat ember yang bersumber dari lokal, disterilkan * Larutan pemutih 10% (untuk sterilisasi); air bersih (untuk membilas) * \~4 L air yang sudah disaring untuk pengisian * Satu botol sampel 1 L yang disterilkan dan dibilas dua kali * Sarung tangan dan masker wajah * kit filtrasi SimplexDNA ([simplexdna.com](https://www.simplexdna.com/)) * KoboToolbox atau yang setara untuk pengambilan data lapangan Pewarnaan ember harus mengikuti skema yang konsisten: warna terang untuk menarik penyerbuk, warna gelap atau warna tanah untuk menarik serangga yang hidup di kayu. Bahan ember, bentuk, dan warna boleh berbeda antarpercobaan, tetapi harus tetap sama dalam satu kegiatan sampling dan disesuaikan dengan tujuan pengumpulan data. #### **Prosedur** 1. **Sterilkan.** Bersihkan setiap ember dengan larutan pemutih 10% dan bilas dua kali dengan air. Untuk menghindari kontaminasi silang, sterilkan di lokasi di lapangan atau segel ember selama pengangkutan dari tempat disinfeksi. 2. **Letakkan.** Tempatkan empat ember di sekitar centroid plot, dengan jarak kira-kira 10 m satu sama lain. Stabilkan agar tidak jatuh: sangga dengan kayu di tanah miring; beri beban batu di tempat yang ada hewan penggembala. Pertahankan penempatan yang konsisten di seluruh lahan (selalu di ruang terbuka, atau selalu dekat semak) — keterbandingan antar lokasi lebih penting daripada satu pilihan penempatan tertentu. 3. **Isi.** Tambahkan kira-kira 1 L air yang sudah disaring ke setiap ember. Masukkan sebatang kayu dari area sekitarnya ke dalam air supaya serangga yang jatuh bisa keluar; yang kami inginkan adalah eDNA mereka, bukan serangganya. 4. **Paparkan selama 72 jam.** Biarkan tanpa gangguan. 5. **Amati.** Kembali setelah 72 jam dan catat untuk setiap ember: apakah turun hujan selama periode paparan, tingkat isi, dan adanya organisme hidup atau mati. Foto setiap ember. 6. **Campurkan.** Dengan memakai sarung tangan dan masker wajah, gunakan botol 1 L yang sudah disterilkan untuk mengukur satu liter dari setiap ember dan gabungkan semuanya ke salah satu ember yang tersisa di lokasi. 7. **Saring dan simpan.** Saring sampel gabungan memakai kit SimplexDNA. Kit ini bekerja secara manual (digerakkan dengan spuit), mudah dipakai di lapangan, dan menyimpan filter dalam buffer yang menjaga DNA pada suhu ruang — keuntungan praktis yang besar di tempat yang tidak ada pendingin. Volume yang bisa disaring berubah tergantung banyaknya kotoran; filter akan makin tersumbat dan mungkin butuh tenaga besar di bagian akhir penyaringan. #### **Gambar X. Protokol ember air, ember berwarna** --- # Agent Instructions: Querying This Documentation If you need additional information that is not directly available in this page, you can query the documentation dynamically by asking a question. Perform an HTTP GET request on the current page URL with the `ask` query parameter: ``` GET https://sexytrees.savimbo.com/methodology/id/lampiran/lampiran-a-protokol-ember-air-wbp.md?ask= ``` The question should be specific, self-contained, and written in natural language. The response will contain a direct answer to the question and relevant excerpts and sources from the documentation. Use this mechanism when the answer is not explicitly present in the current page, you need clarification or additional context, or you want to retrieve related documentation sections.