Protocolo del cubo de agua

Cómo ejecutar el Protocolo del Cubo de Agua (WBP) en campo.

Esto es un bricolaje protocolo; ¡lo que significa que lo estamos construyendo en público! Algunas páginas están en construcción — pero vuelve pronto, ¡se actualiza rápido!

La guía práctica de campo para el Protocolo del Cubo de Agua (WBP). Para teoría y ciencia, consulta Metodología Protocolo del Cubo de Agua.

Materiales

• Cuatro cubos de origen local, esterilizados
• Solución de lejía al 10 % (para esterilización); agua limpia (para enjuague)
• ~4 L de agua filtrada para llenar
• Una botella de muestra de 1 L esterilizada y enjuagada dos veces
• Guantes y mascarillas
• Kit de filtración SimplexDNA (simplexdna.com)
• KoboToolbox o equivalente para la captura de datos de campo

La coloración de los cubos debe seguir un esquema consistente: colores claros para atraer polinizadores, colores oscuros o de tonos terrosos para atraer insectos que habitan en la madera. El material, la forma y el color del cubo pueden variar entre experimentos, pero deben mantenerse constantes dentro de un mismo muestreo y ajustarse a los objetivos de la recopilación de datos.

Procedimiento

1. Esterilizar. Limpia cada cubo con una solución de lejía al 10 % y enjuágalo dos veces con agua. Para evitar la contaminación cruzada, esteriliza en el lugar en el campo o sella los cubos durante el transporte desde el sitio de desinfección.
2. Colocar. Coloca los cuatro cubos alrededor del centroide de la parcela, aproximadamente a 10 m de distancia entre sí. Estabilízalos para que no puedan volcarse: sujétalos con palos en terrenos inclinados; ponles peso con piedras donde haya animales de pastoreo. Mantén una colocación consistente entre parcelas (siempre al aire libre, o siempre cerca de arbustos): la comparabilidad entre sitios importa más que cualquier elección de colocación individual.
3. Llenar. Añade aproximadamente 1 L de agua filtrada a cada cubo. Coloca un palo tomado del área circundante en el agua para que cualquier insecto que caiga dentro pueda salir; queremos su eDNA, no los insectos en sí.
4. Exponer durante 72 horas. Dejar sin perturbar.
5. Observar. Regresa después de 72 horas y registra para cada cubo: si llovió durante el período de exposición, el nivel de llenado y la presencia de cualquier organismo vivo o muerto. Fotografía cada cubo.
6. Compuesto. Con guantes y mascarilla, usa la botella esterilizada de 1 L para medir un litro de cada cubo y combina los cuatro en uno de los cubos restantes en el sitio.
7. Filtrar y almacenar. Filtra la muestra compuesta utilizando el kit SimplexDNA. El kit funciona de forma manual (accionado por jeringa), es intuitivo en el campo y almacena el filtro en un tampón que preserva el ADN a temperatura ambiente — una ventaja práctica importante donde no hay refrigeración disponible. El volumen filtrable varía según la cantidad de residuos; el filtro se obstruye progresivamente y puede requerir bastante fuerza hacia el final de la filtración.

Figura X. Protocolo del cubo de agua, cubos de colores