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# Protocole du seau d'eau

<mark style="color:$danger;">Ceci est un</mark> [<mark style="color:$danger;">bricolage</mark>](broken://pages/ff6c0382e47133c78ffdfddf987d9a27873a9fad) <mark style="color:$danger;">protocole ; ce qui signifie que nous le construisons en public ! Certaines pages sont en cours de construction — mais revenez bientôt, elles se mettent à jour rapidement !</mark>&#x20;

Le guide pratique du Protocole du seau d’eau (WBP). Pour la théorie et la science, voir Méthodologie [Protocole du seau d’eau](/fr/biodiversity-credits.md).

#### **Matériel**

* Quatre seaux stérilisés provenant de la région
* Solution d’eau de Javel à 10 % (pour la stérilisation) ; eau propre (pour le rinçage)
* Environ 4 L d’eau filtrée pour le remplissage
* Une bouteille d’échantillon stérilisée de 1 L, rincée deux fois
* Gants et masques
* Kit de filtration SimplexDNA ([simplexdna.com](https://www.simplexdna.com/))
* KoboToolbox ou équivalent pour la collecte de données sur le terrain

Le coloris des seaux doit suivre un schéma cohérent : couleurs claires pour attirer les pollinisateurs, couleurs sombres ou de terrain pour attirer les insectes vivant dans le bois. Le matériau, la forme et la couleur des seaux peuvent varier d’une expérience à l’autre, mais doivent rester constants au sein d’un même effort d’échantillonnage et être adaptés aux objectifs de la collecte de données.

#### **Procédure**

1. **Stérilisez.** Nettoyez chaque seau avec une solution d’eau de Javel à 10 % et rincez-le deux fois à l’eau. Pour éviter toute contamination croisée, stérilisez sur place dans le champ ou scellez les seaux pendant le transport depuis le site de désinfection.
2. **Placez.** Positionnez les quatre seaux autour du centroïde de la parcelle, à environ 10 m les uns des autres. Stabilisez-les pour qu’ils ne puissent pas basculer : callez-les avec des bâtons sur un terrain en pente ; lestez-les avec des pierres en présence d’animaux au pâturage. Maintenez un placement cohérent d’un champ à l’autre (toujours à découvert, ou toujours près des buissons) — la comparabilité entre les sites compte plus que tout choix de placement individuel.
3. **Remplissez.** Ajoutez environ 1 L d’eau filtrée dans chaque seau. Placez dans l’eau un bâton prélevé dans la zone environnante afin que les insectes qui y tombent puissent en ressortir ; nous voulons leur ADN environnemental, pas les insectes eux-mêmes.
4. **Exposez pendant 72 heures.** Laissez sans être perturbé.
5. **Observez.** Revenez après 72 heures et notez pour chaque seau : s’il a plu pendant la période d’exposition, le niveau de remplissage et la présence d’organismes vivants ou morts. Photographiez chaque seau.
6. **Composite.** En portant des gants et un masque, utilisez la bouteille stérilisée de 1 L pour mesurer un litre de chaque seau et combinez les quatre dans l’un des seaux restants sur le site.
7. **Filtrez et stockez.** Filtrez l’échantillon composite à l’aide du kit SimplexDNA. Le kit fonctionne manuellement (à la seringue), est intuitif sur le terrain et conserve le filtre dans un tampon qui préserve l’ADN à température ambiante — un avantage pratique important lorsque la réfrigération n’est pas disponible. Le volume filtrable varie selon la quantité de débris ; le filtre se colmate progressivement et peut nécessiter une force considérable vers la fin de la filtration.

#### **Figure X. Protocole du seau d’eau, seaux colorés**


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