Protokol Ember Air

Cara menjalankan Protokol Ember Air (WBP) di lapangan.

Ini adalah sebuah bricolage protokol; yang berarti kita membangunnya secara terbuka! Beberapa halaman masih dalam pembangunan — tetapi cek kembali segera, pembaruannya cepat!

Panduan lapangan praktis untuk Protokol Ember Air (WBP). Untuk teori dan ilmu pengetahuan, lihat Metodologi Protokol Ember Air.

Bahan

• Empat ember yang bersumber lokal, disterilkan
• Larutan pemutih 10% (untuk sterilisasi); air bersih (untuk pembilasan)
• ~4 L air tersaring untuk pengisian
• Botol sampel 1 L yang disterilkan, dibilas dua kali
• Sarung tangan dan masker wajah
• Kit filtrasi SimplexDNA (simplexdna.com)
• KoboToolbox atau yang setara untuk pengumpulan data lapangan

Pewarnaan ember harus mengikuti skema yang konsisten: warna terang untuk menarik penyerbuk, warna gelap atau warna tanah untuk menarik serangga penghuni kayu. Bahan, bentuk, dan warna ember dapat bervariasi antar eksperimen, tetapi harus dijaga tetap sama dalam satu upaya pengambilan sampel dan disesuaikan dengan tujuan pengumpulan data.

Prosedur

1. Sterilkan. Bersihkan setiap ember dengan larutan pemutih 10% dan bilas dua kali dengan air. Untuk menghindari kontaminasi silang, sterilkan di lokasi di lapangan atau segel ember selama transportasi dari lokasi disinfeksi.
2. Tempatkan. Posisikan keempat ember di sekitar centroid petak, dengan jarak sekitar 10 m. Stabilkan agar tidak mudah terbalik: ganjal dengan tongkat di tanah yang miring; beri pemberat dengan batu di area yang terdapat hewan penggembala. Pertahankan penempatan yang konsisten di seluruh lahan (selalu di area terbuka, atau selalu dekat semak) — keterbandingan antar lokasi lebih penting daripada pilihan penempatan tunggal apa pun.
3. Isi. Tambahkan sekitar 1 L air tersaring ke setiap ember. Letakkan sebatang tongkat yang diambil dari area sekitarnya ke dalam air agar serangga apa pun yang jatuh dapat keluar; kita menginginkan eDNA mereka, bukan serangganya sendiri.
4. Paparkan selama 72 jam. Biarkan tanpa gangguan.
5. Amati. Kembali setelah 72 jam dan catat untuk setiap ember: apakah terjadi hujan selama periode paparan, tingkat pengisian, dan keberadaan organisme hidup atau mati. Foto setiap ember.
6. Komposit. Dengan mengenakan sarung tangan dan masker wajah, gunakan botol 1 L yang disterilkan untuk mengukur satu liter dari setiap ember dan gabungkan semuanya ke dalam salah satu ember tersisa di lokasi.
7. Saring dan simpan. Saring sampel komposit menggunakan kit SimplexDNA. Kit ini beroperasi secara manual (digerakkan dengan jarum suntik), intuitif di lapangan, dan menyimpan filter dalam buffer yang mempertahankan DNA pada suhu ruang — keuntungan praktis yang signifikan ketika pendinginan tidak tersedia. Volume yang dapat disaring bervariasi tergantung jumlah debris; filter akan semakin tersumbat dan mungkin memerlukan tenaga yang cukup besar menjelang akhir penyaringan.

Gambar X. Protokol ember air, ember berwarna