Protocolo do Balde de Água

Como executar o Protocolo do Balde de Água (WBP) no campo.

Isto é um bricolagem protocolo; o que significa que estamos construindo isso em público! Algumas páginas estão em construção — mas volte em breve, está atualizando rápido!

O guia prático de campo para o Protocolo do Balde com Água (WBP). Para teoria e ciência, veja Metodologia Protocolo do Balde com Água.

Materiais

• Quatro baldes obtidos localmente, esterilizados
• Solução de água sanitária a 10% (para esterilização); água limpa (para enxágue)
• ~4 L de água filtrada para preenchimento
• Um frasco de amostra esterilizado, enxaguado duas vezes, de 1 L
• Luvas e máscaras faciais
• Kit de filtração SimplexDNA (simplexdna.com)
• KoboToolbox ou equivalente para coleta de dados em campo

A coloração dos baldes deve seguir um esquema consistente: cores claras para atrair polinizadores, cores escuras ou tons do terreno para atrair insetos que vivem na madeira. O material, o formato e a cor do balde podem variar entre experimentos, mas devem permanecer constantes dentro de um único esforço de amostragem e estar alinhados aos objetivos da coleta de dados.

Procedimento

1. Esterilize. Limpe cada balde com uma solução de água sanitária a 10% e enxágue duas vezes com água. Para evitar contaminação cruzada, esterilize no local, em campo, ou vede os baldes durante o transporte desde o local de desinfecção.
2. Posicione. Posicione os quatro baldes ao redor do centróide da parcela, a aproximadamente 10 m de distância entre si. Estabilize-os para que não possam tombar: apoie com estacas em terreno inclinado; coloque pedras sobre eles quando houver animais de pastoreio presentes. Mantenha um posicionamento consistente entre os campos (sempre em área aberta ou sempre perto de arbustos) — a comparabilidade entre locais é mais importante do que qualquer escolha individual de posicionamento.
3. Encha. Adicione aproximadamente 1 L de água filtrada a cada balde. Coloque na água um galho retirado da área ao redor, para que quaisquer insetos que caiam dentro possam escapar; queremos o eDNA deles, não os insetos em si.
4. Exponha por 72 horas. Deixe sem perturbação.
5. Observe. Retorne após 72 horas e registre, para cada balde: se choveu durante o período de exposição, o nível de enchimento e a presença de quaisquer organismos vivos ou mortos. Fotografe cada balde.
6. Composto. Usando luvas e máscara facial, use o frasco esterilizado de 1 L para medir um litro de cada balde e combine os quatro em um dos baldes restantes no local.
7. Filtre e armazene. Filtre a amostra composta usando o kit SimplexDNA. O kit funciona manualmente (com seringa), é intuitivo em campo e armazena o filtro em um tampão que preserva o DNA em temperatura ambiente — uma vantagem prática significativa onde não há refrigeração disponível. O volume filtrável varia conforme a quantidade de detritos; o filtro entope progressivamente e pode exigir força considerável no final da filtração.

Figura X. Protocolo do balde com água, baldes coloridos